Исследуемый материал
Мазок со слизистой носоглотки
Метод определения
Экспресс-тесты на антиген SARS-CoV-2 с визуальным отображением полученных результатов (иммунохроматографический метод) - экспресс-тест
Определение специфических антигенных белков (антигенов) коронавируса SARS-CoV-2 – возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома (COVID-19) в мазке со слизистой носоглотки.
SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2) ранее 2019-nCoV (2019 novel coronavirus, Wuhan seafood market pneumonia virus) - одноцепочечный РНК-содержащий вирус.
SARS-CoV-2 относится к большому семейству вирусов – коронавирусов (лат. Coronaviridae), вызывающих респираторные заболевания.
SARS-CoV-2 впервые был обнаружен в конце 2019 году в биологических образцах пациента с атипичной пневмонией во время вспышки пневмонии в городе Ухань (Китай). Вызывает инфекционное заболевание - COVID-19. По предварительным данным первичным источником вируса были животные (генетически близки к SARS-CoV-2 штаммы коронавирусов циркулируют среди подковоносых летучих мышей). В качестве промежуточных хозяев, вероятно, могут выступать другие животные (панголины). На сегодня, основным источником вируса являются инфицированные люди, в том числе находящиеся в инкубационном периоде заболевания.
В настоящее время считается, что инфекция передается воздушно-капельным (при кашле, чихании, разговоре), воздушно-пылевом и контактным путями. При этом факторами передачи могут быть: воздух, пищевые продукты и предметы обихода, контаминированные SARS-CoV-2.
COVID-19 (COronaVIrus Disease 2019) ранее 2019-nCoV - потенциально тяжелая острая респираторная инфекция, вызываемая коронавируса SARS-CoV-2. Представляет собой опасное заболевание, которое может протекать как в форме острой респираторной вирусной инфекции легкого течения, так и в тяжелой форме, специфические осложнения которой связаны с высоким риском смерти.
С января 2020 года Всемирная организация здравоохранения объявила вспышку инфекции, связанной с SARS-CoV-2, чрезвычайной ситуацией в области здравоохранения международного значения, а 11 марта 2020 охарактеризовала мировой масштаб распространения болезни, как пандемию.
Инкубационный период составляет от 2 до 14 суток.
Диагноз коронавирусной инфекции SARS-CoV-2 устанавливается на основании клинического обследования, данных эпидемиологического анамнеза и результатов лабораторных исследований.
Для заболевания характерно наличие клинических проявлений острой респираторной вирусной инфекции. Основными симптомами являются повышение температуры, кашель сухой или с небольшим количеством мокроты, одышка, миалгия и утомление, ощущение заложенности в грудной клетке. На раннем этапе заболевания возможны диарея, тошнота, рвота. Различают легкую, среднюю и тяжелую формы инфекции SARS-CoV-2. Тяжелая форма заболевания протекает как пневмония с острой дыхательной недостаточностью, острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), сепсис.
Патогенез новой коронавирусной инфекции SARS-CoV-2 изучен недостаточно. Данные о длительности и напряженности иммунитета в настоящее время отсутствуют. Иммунитет при инфекциях, вызванных другими представителями семейства коронавирусов, нестойкий и возможно повторное заражение.
Лабораторная диагностика COVID-19
I. Выявление коронавируса SARS-CoV-2:
- Вирусологические методы - позволяют выделить «чистую» культуру вируса. Практическое использование метода ограничено. Используется, прежде всего, с исследовательской и научной целью.
- «Антигенные» тесты. Определение специфических антигенных белков (антигенов) вируса - позволяет обнаружить специфические протеины (белки) SARS-CoV-2 в биологических образцах разного происхождения (прежде всего отделяемом дыхательных путей человека). Таким образом, можно сделать вывод о наличии/отсутствии вируса в исследуемом материале. На сегодня тесты используется в качестве предварительной скрининговой диагностики COVID-19. Имеют высокую специфичность и чувствительность. Наиболее быстрый метод диагностики.
- Определение РНК вируса (метод ПЦР) - наиболее чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения вируса в образцах биологического и не биологического происхождения. Позволяет использовать объективные методы контроля качества, гарантирует высокий уровень достоверности полученных результатов. На сегодня, является методом этиологической диагностики COVID-19.
Метод диагностики COVID-19 с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) признан основным и первоочередным (Приказ МЗ Украины от 28.03.2020 №722; рекомендации Всемирной организации здравоохранения).
В соответствии со Стандартами оказания медицинской помощи «Коронавирусная болезнь (COVID-19)», утвержденных приказом Министерства здравоохранения (МЗ) Украины от 28 марта 2020 № 722, в редакции, утвержденной Приказом Министерства здравоохранения Украины от 17.09.2020 года №2122., в качестве предварительной диагностики COVID-19 у пациентов с клиническими проявлениями ОРВИ можно использовать тесты на антиген SARS-CoV-2. При этом, интерпретация результатов теста на антиген SARS-CoV-2 осуществляется врачом в комплексе с клинической картиной, результатами других видов исследований и в контексте эпидемиологической ситуации.
При положительном результате теста на антиген SARS-CoV-2 необходимо проведение дополнительных исследований на наличие вирусной РНК (метод ПЦР) в биоматериале из верхних дыхательных путей.
II. Выявление антител к возбудителю COVID-19
Серологические исследования для определения антител разных классов (IgM, IgG, IgA) к коронавирусу SARS-CoV-2. Для исследования используются образцы крови (сыворотка).
- Иммунохроматографический анализ («экспресс-тесты») - определение специфических антител IgM, IgG, IgA (дифференцированно, или суммарно) к антигенам коронавируса SARS-CoV-2. Результаты требуют подтверждения более надежными методиками.
- Иммуно-ферментный анализ (ИФА) в различных модификациях - определение специфических IgM, IgG, IgА (дифференцированно, или суммарно) к антигенам коронавируса SARS-CoV-2. Наиболее специфичный серологический метод. Диагностическая точность тестирования зависит от используемой технологии и тест-системы.
III. Дополнительные лабораторные исследования (диагностика осложнений COVID-19): общий анализ крови, С-реактивный белок, прокальцитонин, Д-димер, ферритин, тропонин, биохимические маркеры состояния печени, почек.
Аналитическая чувствительность
По анализу конечного разведения минимально-выявляемая концентрация вируса составляет 755 TCID 50/мл*.
*TCID 50/мл – количественная единица измерения титра вирусных частиц, определяемая по конечному разведению, необходимому для уничтожения 50% инфицированных хозяев или для создания цитопатического эффекта в 50% инокулированных клеток тканевой культуры в лабораторных условиях.
Аналитическая специфичность
Перекрестных реакций с вирусами (коронавирусы (не относящиеся к SARS-CoV-2), вирус гриппа А/В, аденовирусы, риновирусы, энтеровирусы, вирус краснухи, эпидемического паротита, полиомиелита, кори, простого герпеса 1/2 типов, эховирусы, респираторно-синцитиальный вирус) и микроорганизмами (Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Candida, Enterobacteriaceae) не обнаружено.
Литература
- Наказ МОЗ України від 28.03.2020 № 722 "Організація надання медичної допомоги хворим на коронавірусну хворобу (COVID-19)" (в редакції, затвердженої Наказом МОЗ України від 17.09.2020 года №2122.
- Яцышина С.Б. Острые респираторные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник. Под ред. В.И. Покровского, М.Г. Твороговой, Г.А. Шипулина. - М.: Изд. «Бином». 2013:647.
-
Novel Coronavirus (2019-nCoV). World Health Organisation.
-
4. Current performance of COVID-19 test methods and devices and proposed performance criteria, Working document of Commission services. European Commission, 16 апреля 2020
- CDC. Interim Clinical Guidance for Management of Patients with Confirmed Coronavirus Disease (COVID-19) (англ.). Coronavirus Disease 2019 (COVID-19). U. S. Centers for Disease Control and Prevention (11 February 2020).
- Giuseppe Lippi, Andrea Horvath and Khosrow Adeli* On behalf of the IFCC Taskforce on COVID-19. Editorial and executive summary: IFCC Interim Guidelines on clinical laboratory testing during the COVID-19 pandemic. Clinical chemistry and laboratory medicine 10/6/2020.
