Антитіла, асоційовані з аутоімунними хворобами печінки (IgG, «печінковий» профіль), імуноблот

Синоніми
Аутоімунні захворювання печінки; імуноблот печінковий; серологічні маркери аутоімунних хвороб печінки (імуноблот); антитіла до антигенів, асоційованим з аутоімунними хворобами печінки; маркери аутоімунного гепатиту, первинного біліарного цирозу; Autoimmune liver diseases.

Клінічне значення, діагностичні особливості, тощо

Визначення аутоантитіл (імуноглобулінів класу IgG) в сироватці крові людини методом імунного блотингу до 14 антигенів (AMA-M2, M2-3E, Sp100, PML, gp210, LKM-1, LC-1, SLA / LP, SS-A, Ro-52, Scl-70, CENP A, CENP B і PGDH) використовується для високоспецифічної серологічної діагностики аутоімунних захворювань печінки.
Аутоімунні захворювання печінки (АІЗП, AiLD) - група аутоімунних захворювань, що характеризується переважним ураженням тканини печінки, жовчовивідних шляхів.
Включають:

1. аутоімунний гепатит (АІГ);
2. первинний біліарний цироз (ПБЦ);
3. первинний склерозуючий холангіт (ПСХ).

Для діагностики АІЗП вкрай важливо виключити вірусні гепатити (A, B, C, D, Е), гепатити, пов'язані з іншими запальними захворюваннями печінки, токсичні гепатити, а також метаболічні і генетично обумовлені захворювання печінки.
Аутоімунний гепатит (АІГ) - найбільш часте аутоімунне захворювання печінки. Характеризується хронічним запаленням печінки з гіпергамаглобулінемією і наявністю аутоантитіл. Етіологія - не відома. Тригерними (запускаючими) факторами можуть виступати інфекційні агенти, алкоголь, гормональна перебудова в пубертатному і клімактеричному періодах життя, лікарські засоби, стресові ситуації. Основну роль у патогенезі відіграє порушення функцій імунної системи в цілому або окремих її компонентів (Т-лімфоцитів), що призводить до аутоімунного запалення внаслідок синтезу агресивних антитіл і розмноження аутоагресивних клонів кілерних клітин.
Клінічні прояви:

• болі та/або тяжкість в правому підребер'ї, зниження апетиту;
• субфебрильна температура тіла, стомлюваність, слабкість, зниження працездатності;
• жовтяниця;
• малі печінкові знаки на шкірі (пальмарна еритема, телеангіоектазії);
• гепатомегалія, спленомегалія;
• порушення менструального циклу, аменорея (у 30% жінок);
• артралгії, міалгії, шкірні висипи (більш ніж у 25% хворих), трофічні виразки на шкірі кінцівок та ін.;
• ураження кишечника - неспецифічний виразковий коліт;
• ураження нирок - гломерулонефрит;
• ураження серця - перикардит, міокардит;
• ураження щитоподібної залози - тиреоїдит;
• у 30% пацієнтів початок захворювання відповідає клінічній картині гострого гепатиту.

Діагностичні критерії АІГ.

1. Цитоліз: підвищення активності сироваткових трансаміназ (АЛТ, АСТ).
2. Підвищення рівня сироваткових гаммаглобулінів.
3. Підвищення рівня імуноглобуліну G (IgG загальний).
4. Позитивні серологічні реакції (наприклад, позитивна реакція зв'язування комплементу (РСК) при діагностиці сифілісу).
5. Морфологічні зміни в гістологічних зразках тканини печінки.
6. Наявність аутоантитіл в сироватці крові.

Наявність аутоантитіл є найбільш важливим маркером АІГ.
Залежно від типу аутоантитіл виділяють гепатити 3 типів, які відрізняються також епідеміологічними параметрами і характером відповіді на терапію.

Аутоімунний гепатит 1 типу - відзначається в осіб віком 15-40 років, дещо частіше у жінок. Характеризується прогресуючим перебігом і доброю відповіддю на імуносупресивну терапію.
Діагностичні маркери:

• гіпергамаглобулінемія (переважно за рахунок імуноглобуліну IgG);
• антитіла до гладкої мускулатури (ASMA);
• антиядерні антитіла (АНА).

Аутоімунний гепатит 2 типу - захворювання частіше розвивається в дитячому віці, другий пік припадає на вік 35-65 років. На відміну від АІГ 1 типу, захворювання протікає більш активно, частіше призводить до цирозу і нерідко супроводжується іншими аутоімунним захворюваннями. Часто відзначається гострий початок, перебіг з періодами загострення і згасання процесу, з швидким розвитком цирозу.
Діагностичні маркери:

• антитіла до LKM-1, LC-1.

Аутоімунний гепатит 3 типу - складає 20% від усіх випадків АІГ. Гірше інших АІГ піддається імуносупресивному лікуванню. У деяких класифікаціях не виділяється цей тип АІГ (відноситься до АІГ 1 типу).
Діагностичні маркери:

• антитіла до розчинного печінкового антигену (SLA / LP).

Типи аутоантитіл, що виявляються при АІГ:

Антиядерні антитіла (АНА): антитіла до ядерних антигенів SS-A, Ro-52, Scl-70, CENP A, CENP B	- виявляються при АІГ 1 типу (до 100% випадків).
Антитіла до гладкої мускулатури (АГМА, ASMA)	- виявляються в поєднанні з АНА. Визначаються тільки методами IIFT (непряма імунофлуоресценція).
Anti-LKM-1 (антитіла до мікросомального антигену печінки і нирок)	- найчастіше визначаються у хворих АІГ 2 типу, у яких відсутні АНА і АГМА. Може зустрічатися при вірусних гепатитах С (5-10%). Вироблення антитіл також може стимулювати прийом лікарських препаратів: тиенам, дигідралазин, галотан, фенітоїн, фенобарбітал, карбамазепін і ін. Виявлення високих титрів LKM в динаміці вказує на швидко прогресуючий перебіг захворювання. Ізольоване виявлення LKM у пацієнта без будь-яких інших ознак ураження печінки не є критерієм для постановки діагнозу аутоімунного гепатиту.
Anti-LC-1 (протицитозольні печінкові антитіла 1 типу)	- вважаються високоспеціфічними для АІГ 2 типу (специфічність - близько 100%); можуть зустрічатися як разом з антитілами LKM-1 і ін., так і ізольовано від всіх антитіл. У 14% хворих на аутоімунний гепатит вони можуть бути єдиним виявляються типом антитіл.
Anti-SLA/LP (антитіла до розчинного антигену печінки, до печінково-панкреатичного антигену)	- виявляються при АІГ 3 типу, а також у 10-15% хворих з АІГ 1 типу. Специфічність - близько 100%.
AMA-M2 (анти-мітохондріальні антитіла тип M2)	- можуть виявлятися при АІГ в 20-30% випадків (при перехресному синдромі).
Anti-PGDH (антитіла до D-3-фосфогліцератдегідрогеназе)	- виявляються у 80% нелікованих хворих АІГ і до 61% пацієнтів з АІГ, які отримували глюкокортикоїдную терапію.
Anti-Ro-52 (ядерний антиген)	- при виявленні спільно з SLA / LP відзначається більш висока активність АІГ з важким перебігом.

У більш ніж 90% хворих АІГ виявляються принаймні один вид аутоімунних антитіл.
При діагностиці АІГ доцільно оцінювати виявлені маркери в балах:

Діагностичний критерій	Кількість балів
Рівень сироваткового IgG >16 г/л	1
Рівень сироваткового IgG >18,5 г/л	2
Наявність аутоантитіл AНA, ASMA або LKM	1
Наявність аутоантитіл LC-1, SLA/LP	2
Гістологічний висновок, який не суперечить діагнозу АІГ	1
Гістологічний висновок характерний для АІГ	2
Відсутність вірусного гепатиту	2
6 балів - діагноз АІГ вірогідний; ≥7 діагноз АІГ підтверджений

Виявлення аутоантитіл, в поєднанні з гіпергамаглобулінемією, забезпечує 4 з 7 балів, необхідних для постановки остаточного діагнозу аутоімунний гепатит.

Первинний біліарний цироз (ПБЦ) - прогресуюче деструктивне запалення внутрішньопечінкових жовчних протоків з порушенням відтоку жовчі і розвитком внутрішньопечінкового холестазу різного ступеня важкості. Тривале існування холестазу супроводжується фіброзом і формування цирозу печінки. Етіологія - не відома. Тригерними факторами можуть виступати інфекційні агенти, алкоголь, лікарські засоби.
Клінічні прояви:

• свербіж шкіри різного ступеня інтенсивності (75,8%);
• слабкість, стомлюваність (68,8%), схуднення (24,6%);
• зміни шкірних покривів (сухість, гіперкератоз, гіперпігментація, ксантелазми, ксантоми, сліди разчісів); жовтушність шкірних покривів (12,5%);
• гепатомегалія (87,7%), спленомегалія (46,7%);
• портальна гіпертензія
• часте поєднання (29,7%) з іншими аутоімунними захворюваннями і синдромами (фіброзуючий альвеоліт, аутоімунний тиреоїдит, ревматоїдний артрит, с-м Шегрена, с-м Рейно та ін.)
• безсимптомний перебіг (7-9%).

Діагностичні критерії ПБЦ.

1. Високі рівні маркерів холестазу (лужна фосфотаза, ГГТ).
2. Незначне підвищення рівнів АЛТ, АСТ.
3. Підвищення рівня сироваткового IgM.
4. Наявність аутоантитіл в сироватці крові.
5. Гістологічні ознаки негнійного холангіту, перідуктулярного фіброзу, накопичення міді в тканині печінки.

Наявність аутоантитіл, є важливим маркером ПЦБ.
Типи аутоантитіл, що виявляються при ПЦБ:

AMA-M2 (анти-мітохондріальні антитіла тип M2)	- виявляються в 85-95% випадків ПБЦ. Можуть виявлятися у пацієнтів з АІГ (до 25% випадків), частіше при перехресному синдромі. Практично не виявляються при вірусних гепатитах і метаболічних захворюваннях печінки.
Anti-M2-3E (рекомбінантні антитіла до домінантною субодиниці (3Е) антигену М2)	- виявляються в 95% випадків ПБЦ разом з АМА-М2 (дозволяють підвищити чутливість методу).
Антиядерні антитіла (АНА): антитіла до ядерних антигенів Sp100, PML, gp210, Ro-52	- визначаються у частини хворих ПБЦ. Можуть виявлятися у АМА-негативних пацієнтів. Одночасне виявлення AMA-M2 (M2-3E) і Anti-gp210, Anti-Ro-52 є поганим прогностичним маркером хвороби. Sp100 антитіла вкрай рідко виявляються при АІГ, ПСХ. Можуть зустрічатися при ревматоїдному артриті (3%), системному червоному вовчаку (до 10%), системній склеродермії (5%), синдромі Шегрена (2%). gp210 антитіла високоспецифічні для ПБЦ (специфічність до 99,5%). При АІГ, ревматоїдному артриті, поліміозиті, синдромі Шегрена зустрічаються вкрай рідко.

Первинний склерозуючий холангіт (ПСХ) - хронічне прогресуюче захворювання, що супроводжується склерозуючим запаленням внутрішньо- і позапечінкових жовчних проток з формування вторинного біліарного цирозу. Хворіють переважно чоловіки молодого віку (середній вік 40 років).
Клінічні прояви:

• зниження ваги, підвищена стомлюваність, біль у правому підребер'ї, свербіж шкіри, мінлива жовтяниця;
• в ряді випадків клінічна картина імітує гострий бактеріальний холангіт: озноб та лихоманка, жовтяниця, свербіж шкіри і біль в підребер'ї;
• у 50-70% хворих спостерігається поєднання ПСХ з неспецифічним виразковим колітом, у 10-13% - з хворобою Крона, у 10-25% - ізольована форма ПСХ. Може поєднуватися з іншими аутоімунними захворюваннями, в тому числі з тиреоїдитом і цукровим діабетом 1 типу.

Діагностичні критерії ПСХ.

• Підвищення сироваткових рівнів лужної фосфатази, білірубіну, ГГТ, IgM, IgG.
• Можуть визначатися антиядерні антитіла (АНА), перинуклеарний антінейтрофільні цитоплазматичні антитіла (pANCA).
• УЗД, МРТ, РХПГ - ознаки холангіту.
• Гістологічні ознаки (основний діагностичний маркер ПСХ): виражений склероз проток і навколо проток із здавленням їх просвіту аж до повного зникнення (облітеруючий атеросклероз). Специфічні для ПСХ ознаки при біопсії печінки виявляються нечасто (10-30% випадків), що обумовлено нерівномірністю поразки проток.

Лабораторна діагностика аутоімунних ЗАХВОРЮВАНЬ ПЕЧІНКИ

1. Біохімічні маркери стану печінки: АЛТ, АСТ, білірубін (загальний, прямий), ГГТ, лужна фосфатаза, загальний білок, ЛДГ, протромбін та ін.
2. Білкові фракції крові.
3. Рівень сироваткового IgG, IgM.
4. Маркери вірусних гепатитів (HBsAg, Anti-HBcor IgM, ДНК ВГВ, Anti-HCV total, РНК ВГС, Anti-HAV IgM, РНК ВГG, РНК ВГD) - диференціальна діагностика.
5. Аутоантитіла (специфічні маркери АІЗП).
6. Патоморфологічне дослідження (гістологія).

Антитіла, асоційовані з аутоімунними захворюваннями печінки:
Cкрінгові тести - метод ІФА (ELISA):

• Антиядерні антитіла (без диференціювання) - тест №125;
• Антитіла до мітохондрій (АМА-М2) - тест №804.

Підтверджуючі дослідження - метод імунного блоттинга (імуноблот).

• Імуноблоту: профіль антиядерних антитіл (АНА) - тест №1395;
• Імуноблоту: профіль антинейтрофільних цитоплазматичних антитіл (АНЦА) - тест №1394;
• Імуноблоту: профіль «печінковий» (антитіла, асоційовані з аутоімунними захворюваннями печінки) - тест №1391.

 

Лiтература

1. Голованова Е. В., Лазебник Л. Б., Конев Ю. В., Радченко В. Г., Селиверстов П. В., Ситкин С. И., Ткаченко Е. И. АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПЕЧЕНИ: КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ. Клинические рекомендации, НОГР, 2015 г.
2. Лапин С.В., Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство «Человек», СПб, 2010 г.
3. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. М.: Анахарсис, 2005 г.
4. Пикулёв Д.В., Егорова И.С., Сотникова О.В.. Перекрестный синдром при аутоиммунных заболеваниях печени. Гастроентерология №1 (10) Медицинский альманах, 2010 г.
5. Матеріали фірми-виробника тест-систем.

Спеціальної підготовки не потрібно. Взяття крові проводиться натщесерце або не раніше 4 годин після останнього прийому їжі.

 

Лiтература

1. Голованова Е. В., Лазебник Л. Б., Конев Ю. В., Радченко В. Г., Селиверстов П. В., Ситкин С. И., Ткаченко Е. И. АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПЕЧЕНИ: КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ. Клинические рекомендации, НОГР, 2015 г.
2. Лапин С.В., Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство «Человек», СПб, 2010 г.
3. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. М.: Анахарсис, 2005 г.
4. Пикулёв Д.В., Егорова И.С., Сотникова О.В.. Перекрестный синдром при аутоиммунных заболеваниях печени. Гастроентерология №1 (10) Медицинский альманах, 2010 г.
5. Матеріали фірми-виробника тест-систем.

1. Ознаки ураження тканини печінки неясної етіології (підвищення рівня біохімічних маркерів стану печінки).
2. Підозра на аутоімунне ураження печінки.
   
3. Обтяжений анамнез по аутоімунних захворюванням.
   
4. Позитивні або сумнівні результати скринінгового тестування, проведеного із використанням інших методів серологічної діагностики (наприклад, ІФА).
   
5. Результати первинного тестування (ІФА) не можна співставити з клінічними даними.
   
6. Визначення діагностичних маркерів конкретних аутоімунних захворювань (диференційна діагностика).
   
7. Визначення стадії захворювання, прогнозу.
   
8. Оцінка ефективності лікування.

 

Лiтература

1. Голованова Е. В., Лазебник Л. Б., Конев Ю. В., Радченко В. Г., Селиверстов П. В., Ситкин С. И., Ткаченко Е. И. АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПЕЧЕНИ: КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ. Клинические рекомендации, НОГР, 2015 г.
2. Лапин С.В., Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство «Человек», СПб, 2010 г.
3. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. М.: Анахарсис, 2005 г.
4. Пикулёв Д.В., Егорова И.С., Сотникова О.В.. Перекрестный синдром при аутоиммунных заболеваниях печени. Гастроентерология №1 (10) Медицинский альманах, 2010 г.
5. Матеріали фірми-виробника тест-систем.

Інтерпретація результатів дослідження містить інформацію для лікаря і не є діагнозом. Інформацію з цього розділу не можна використовувати для самодіагностики і самолікування. Точний діагноз ставить лікар, використовуючи як результати цього обстеження, так і потрібну інформацію з інших джерел: анамнезу, результатів інших обстежень і так далі.

Визначення наявності антитіл проводиться диференційовано (окремо для кожного антигену). Показники, що визначаються (антитіла до антигенів): AMA-M2, M2-3E, Sp100, PML, gp210, LKM-1, LC-1, SLA / LP, SS-A, Ro-52, Scl-70, CENP A, CENP B, PGDH.
Одиниці виміру в лабораторії ІНВІТРО
Результат тестування оцінюється в якісному форматі:

• антитіла - ВИЯВЛЕНО
• антитіла - НЕ ВИЯВЛЕНО

Референсні значення
У нормі аутоантитіла, асоційовані з аутоімунними захворюваннями печінки - не визначаються.

У бланку результатів тестування надаються:

1. Паспортні дані пацієнта, інформація, щодо проведеного дослідження.
2. Протокол тестування (візуалізація) молекул, фіксованих на мембранах (стрипах), з оцінкою глибини світлопоглиння.
3. Інтерпретація отриманих даних (диференційована оцінка результатів визначення реакції антитіл з різними антигенами, інтенсивність реакції).Інтенсивність реакції оцінюється в умовних одиницях, які визначають клас реакції.Клас реакції дозволяє оцінити «ступінь позитивності» результату: 0 - негативно; (+) – «сіра зона»; +; ++ - позитивно; +++ - сильнопозитивно. Інтенсивність реакції не корелює лінійно з концентрацією антитіл в досліджуваному зразку, але відображає склад та афінність аутоантитіл.
4. Висновок.

• При відсутності реакції з усіма антигенами: «Антитіла класу IgG до антигенів AMA-M2, M2-3E, Sp100, PML, gp210, LKM-1, LC-1, SLA / LP, SS-A, Ro-52, Scl- 70, CENP A, CENP B, PGDH - не виявлені».
• При наявності реакції з будь-яким антигеном: «ВИЯВЛЕНО антитіла класу IgG до антигенів: ... (вказуються конкретні антигени до якому виявлені антитіла)».

ІНТЕРПРЕТАЦІЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ЛАБОРАТОРНОГО ТЕСТУВАННЯ
При виявленні антитіл, асоційованих з аутоімунними захворюваннями печінки необхідно оцінити результати з урахуванням клінічних даних і результатів інших додаткових методів досліджень.

1. Маркери аутоімунного гепатиту (АІГ): основні - LKM-1, LC-1, SLA / LP, PGDH; додаткові - Ro-52, SS-A, Scl-70, CENP A, CENP B.
2. Маркери первинного біліарного цирозу (ПБС): основні - AMA-M2, M2-3E; додаткові - PML, gp210, Ro-52.
3. Маркери первинного слерозуючого холангіту (ПСХ): Sp100, PML, gp210, Ro-52, Ro-52, SS-A, Scl-70, CENP A, CENP B.

Можливий діагноз	Антитіла до антигенів
	AMA-M2 M2-3E	Sp100 PML gp210	LKM-1 LC-1	SLA/LP	PGDH	SS-A Scl-70 CENP A CENP B	Ro-52
Аутоімунні захворювання печінки малоймовірні	-	-	-	-	-	-	-
Аутоімунний гепатит (АІГ)	-	-	+	+	+	+	+
Первинний біліарний цироз (ПБС)	+	+	-	-	-	-	+
Первинний слерозуючий холангіт (ПСХ	-	+/-	-	-	-	+/-	-
Перехрестний синдром	+	+	+	+	+	+	+

+ антитіла частіше присутні; - антитіла частіше відсутні; +/- антитіла можуть бути присутніми, але результати потрібно інтерпретувати з урахуванням інших даних

Інтерферуючи фактори
Поява окремих класів аутоантитіл в крові можлива при хронічних вірусних гепатитах, прийомі лікарських препаратів (тиенам, дигідралазин, галотан, фенітоїн, фенобарбітал, карбамазепін та ін.), При ревматоїдному артриті, системному червоному вовчаку, системній склеродермії та деяких інших аутоімунних захворюваннях.

 

Лiтература

1. Голованова Е. В., Лазебник Л. Б., Конев Ю. В., Радченко В. Г., Селиверстов П. В., Ситкин С. И., Ткаченко Е. И. АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПЕЧЕНИ: КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ. Клинические рекомендации, НОГР, 2015 г.
2. Лапин С.В., Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство «Человек», СПб, 2010 г.
3. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. М.: Анахарсис, 2005 г.
4. Пикулёв Д.В., Егорова И.С., Сотникова О.В.. Перекрестный синдром при аутоиммунных заболеваниях печени. Гастроентерология №1 (10) Медицинский альманах, 2010 г.
5. Матеріали фірми-виробника тест-систем.